Tha PCR, no freagairt slabhraidh polymerase, na dhòigh air a chleachdadh gus sreathan DNA àrdachadh.Chaidh a leasachadh an toiseach anns na 1980n le Kary Mullis, a choisinn an Duais Nobel ann an Ceimigeachd ann an 1993 airson a chuid obrach.Tha PCR air bith-eòlas moileciuil ath-nuadhachadh, a’ toirt cothrom do luchd-rannsachaidh DNA a mheudachadh bho shamhlaichean beaga agus sgrùdadh mionaideach a dhèanamh air.
Is e pròiseas trì-ceum a th’ ann am PCR a bhios a’ gabhail àite ann an cearcall teirmeach, inneal a dh’ atharraicheas teòthachd measgachadh freagairt gu luath.Is e na trì ceumannan dì-nàdurachadh, annealing, agus leudachadh.
Anns a’ chiad cheum, dì-nàdarachadh, tha an DNA dà-shreath air a theasachadh gu teòthachd àrd (mar as trice timcheall air 95 ° C) gus na bannan hydrogen a tha a’ cumail an dà shreath ri chèile a bhriseadh.Tha seo mar thoradh air dà mholacile DNA aon-shreath.
Anns an dàrna ceum, annealing, tha an teòthachd air ìsleachadh gu timcheall air 55 ° C gus leigeil leis na primers a dhol a-steach do na sreathan co-phàirteach air an DNA aon-shreath.Is e pìosan goirid de DNA a th’ ann an primers a tha air an dealbhadh gus a bhith co-ionnan ris na sreathan de dh’ ùidh air an DNA targaidte.
Anns an treas ceum, leudachadh, tha an teòthachd air a thogail gu timcheall air 72 ° C gus leigeil leis an Taq polymerase (seòrsa de DNA polymerase) sreath ùr de DNA a cho-chur bho na primers.Tha an Taq polymerase a 'tighinn bho bhitheag a tha a' fuireach ann an fuarain teth agus a tha comasach air seasamh ris an teòthachd àrd a thathar a 'cleachdadh ann am PCR.
Às deidh aon chearcall de PCR, is e an toradh dà leth-bhreac den t-sreath targaid DNA.Le bhith ag ath-aithris nan trì ceumannan airson grunn chuairtean (mar as trice 30-40), faodar an àireamh de leth-bhreacan den t-sreath targaid DNA àrdachadh gu h-obann.Tha seo a’ ciallachadh gum faodar eadhon glè bheag de DNA tòiseachaidh a mheudachadh gus milleanan no eadhon billeanan de leth-bhreacan a thoirt gu buil.
Tha grunn thagraidhean aig PCR ann an rannsachadh agus breithneachadh.Tha e air a chleachdadh ann an gintinneachd gus sgrùdadh a dhèanamh air gnìomh ghinean agus mùthaidhean, ann am forensics gus fianais DNA a sgrùdadh, ann am breithneachadh galair gabhaltach gus làthaireachd pathogens a lorg, agus ann am breithneachadh ro-bhreith gus sgrìonadh airson eas-òrdughan ginteil ann am fetuses.
Chaidh PCR atharrachadh cuideachd airson a chleachdadh ann an grunn atharrachaidhean, leithid PCR cainneachdail (qPCR), a leigeas leis an ìre de DNA a thomhas agus tar-sgrìobhadh cùl PCR (RT-PCR), a ghabhas cleachdadh gus sreathan RNA àrdachadh.
A dh 'aindeoin an iomadh tagradh a th' ann, tha crìochan aig PCR.Feumaidh e eòlas air an t-sreath targaid agus dealbhadh primers iomchaidh, agus faodaidh e a bhith buailteach do mhearachd mura h-eil na suidheachaidhean freagairt air an ùrachadh gu ceart.Ach, le dealbhadh deuchainneach faiceallach agus coileanadh, tha PCR fhathast mar aon de na h-innealan as cumhachdaiche ann am bith-eòlas moileciuil.
Ùine puist: Feb-22-2023